洁净室微生物粒子检测

洁净室微生物粒子检测

空气中悬浮微生物的测定有多种，但其测定的基本过程都是经过捕集-培养-计数的过程，目前普遍采用的是浮游菌和沉降菌的测试方法，浮游菌测试方法是通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基， 经若干时间在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数， 以此来判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数。 沉降军测试方法是通过重力自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养皿中的培养基上，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数。

1、检测要求

（1）检测前，被测洁净室的运行状态**在正常状态，其温度、湿度、风量、风压及风速**在控制的规定值内； 被测试的洁净室（区） 应已进行过消毒； 同时，洁净室的测试状态**符合生产工艺的要求，并在测试报告中注明其测试状态（空态、静态、动态） 。

（2）测试人员**穿戴洁净服，而且一般不得**过两个人。

（3）净化空调系统正常运转时间对单向流如 5 级（100 级）洁净室或层流工作台不得少于 10min；对非单向流如 7 级（10000 级） 、8 级（100000 级）的洁净室不得少于 30min。

（4）采样点的布置及要求：

①浮游菌测试时，采样点位置可以与悬浮粒子测试点相同。工作区测点位置距地面 0.8～1.5m（略**工作面） ；送风口测点位置距送风面 30cm 左右。根据需要可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。浮游菌测试的较少采样点数为日常监测及环境验证两种情况，见下表 7-11：

表 7-11 浮游菌测试较少采样点数

注：1、表中面积，对单向流洁净室（包括层流工作台） ，指的是送风口表面积；对非单向汉洁净室，指的是房间面积。

2、日常监测的采样点数由生产工艺的关键操作点来确定。

浮游菌测试法的较小采样量应按不同空气洁净度等级确定，见下表 7-12：

表 7-12 浮游菌测试较小采样量

②沉降菌测试时，采样点的位置可以与悬浮粒子测试点相同。工作区采样点的位置距地面 0.8-1.5m（略**工作面） ；根据需要可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。沉降菌测试的较少采样点数可见下表 7-13：

表 7-13 沉降菌测试较少采样点数

对沉降菌法不仅要满足较少采样总数，还宜满足较少培养皿数，见下表 7-14：

表 7-14 沉降菌测试较少培养皿数

2、检测方法

（1）浮游菌的测试

①**应对测试仪器、培养皿表面进行严格消毒，采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于 100 级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内；用消毒剂擦净培养皿的外表面，把采样器的顶盖、转盘以及罩子内外面消毒干净；采样口及采样管在使用前**高温灭菌。

②采样者应穿戴与被测洁净室相应的洁净服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

③仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于 5min,并调好流量、转盘转速。

④关闭真空泵，放入培养皿，盖好盖子后调节采样器。

⑤置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵、转动定时器，根据采样量选定采样时间。

⑥全部采样结束后，将培养皿倒置于 30～35℃恒温培养箱中培养，时间不小于 48h。

⑦用肉眼直接计数，然后用 5～10 倍放大镜检查，是否有遗漏。若平板上有两个或两个以上的菌落重叠，分辨时仍以两个或两个以上菌落计数。

（2）沉降菌的测试

①**也是对测试仪器、培养皿表面进行严格消毒灭菌，在 37℃，48h 恒温培养箱中培养观察，确信无菌后方可使用。

②一般用φ90mm 的沉降平皿， 注入 20ml 培养基， 放在测点处， 开盖暴露 30min，将培养皿盖盖上后倒置。然后在 30～35℃恒温培养箱中经 48h 培养为用肉眼计菌落数，并记录生成的菌落数 cfu(colony forming units)，然后用 5～10 倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有两个或两个以上的菌落重叠，分辨时仍以两个或两个以上菌落计数。 由于菌落实验操作程序较为繁多， 如有可能采用增加空白器皿对照法以减少偶然误差可能性，另外，由于条件限制，有时测量者将培养皿放在洁净室地面上，这种方法会造成较大误差，建议做**支架来保持测定高度。

（3）合格标准

国内外有关浮游菌和沉降菌测定的标准详见下表 7-15、表 7-16：